Page 7 - E-Tez Bülteni Mart 2025, SAYI 2

Tez Özeti

α-Amilaz ve α-glukosidaz, Glikozit hidrolazın temsilcilerindendir. Bu tez kapsamında, Anoxybacillus flavithermus 2641T α-amilaz ve α-
glukosidaz genlerinin klonlanması, ekspresyonları, rekombinant olarak üretilen enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonları ve CLEA
yöntemi ile immobilizasyonları yapıldı. α-Amilaz ve α-glukosidazın doğal PAGE ve zimogram analizleri yapılarak, optimum pH,
optimum sıcaklık ve kinetik parametreleri belirlendi. Toprak alkali metaller, alkali metaller, potansiyel inhibitörler, iyonik ve non-iyonik
deterjanların, organik çözücülerin α-amilaz ve α-glukosidaz üzerine etkileri araştırıldı. α-Amilazın, substrat olarak patates nişastası
varlığında optimum pH’sı 6,0-8,0 aralığında bulundu. Enzimin optimum sıcaklığı 70 °C olarak belirlendi. Patates nişastası için, α-
amilazın Lineweaver-Burk eğrisi ile Km değeri 1,14 mg/ml, Vmax değeri 31 U/mg olarak belirlendi. α-Glukosidazın substrat olarak
pNPG varlığında optimum pH’sı 6,0-8,0 aralığında, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Çapraz bağlı enzim agregatları
(CLEA) metodu kullanılarak enzimlerin ayrı olarak ve birlikte immoblizasyonu yapıldı. İmmobilize α-amilazın da karakterizasyonu
yapılarak, optimum pH’sı 8,0-9,0, optimum sıcaklığı 70 °C, Km ve Vmax değerleri sırası ile, 0,94 mg/ml ve 35 U/ml olarak belirlendi.
İmmobilize α-glukosidaz için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 6,0-8,0 ve Km ve Vmax değerleri sırası ile 0,66 mM ve 811 U/mg
olarak belirlendi. Birlikte immobilize edilen enzimler için optimum sıcaklık 55 °C, optimum pH 7,4 olarak belirlendi.
Anahtar kelimeler: α-Amilaz, α-Glukosidaz, Anoxybacillus flavithermus 2641T, immobilizasyon, karakterizasyon