Page 3 - E-Tez Bülteni Mart 2025, SAYI 1

Tez Özeti

Sterilizasyon işlemi sağlık sektöründe, cerrahi aletler, tıbbi cihazlar, laboratuvar ekipmanları ve ilaç üretim süreçlerinde hayati önem
taşımaktadır. Sterilizasyonun doğruluğunu ölçmek için biyolojik indikatörler kullanılmaktadır. Biyolojik indikatörlerin çalışma
mekanizması, bakteri hücrelerinin ortama salgıladığı enzimlerin aktivitesine dayanmaktadır. Tezin amacı, daha aktif glukosidaz ile
sterilizasyonun başarısız olması halinde çok daha erken cevap veren bir indikatör bakterisi geliştirmektir. Bu amaçla, Geobacillus
stearothermophilus bakterisinin alfa glukosidaz genlerinin klonlanması, E. coli’de ifadesi, saflaştırılması, nokta mutasyonları ile enzim
aktivitesinin artırılması yapılmıştır. Son olarak en aktif mutant seçilerek, bu aktif glukosidaz geninin Geobacillus stearothermophilus’a
tekrar aktarılma deneyleri gerçekleştirilmiştir. Sonuç olarak, α-glukosidaz ve oligo-α-glukosidaz genleri E. coli’de başarılı bir şekilde
ekspres edilmiştir. Bu iki gen üzerinde on adet nokta mutasyonu yapılmış ve bu enzimlerin biyokimyasal karakterizasyonu
gerçekleştirilmiş ve Km, Vmax ve kcat değerleri hesaplanarak, enzim aktiviteleri karşılaştırılmıştır. Ardından, katalitik aktivitesi yüksek
mutant seçilerek, mekik vektör pNW33N’ye klonlanmıştır ve mutant vejetatif Geobacillus stearothermophilus hücrelerinin yaban
hücrelere kıyasla daha yüksek aktivite gösterdiği tespit edilmiştir. Son olarak, Mutant Geobacillus stearothermophilus sporlarıyla
gerçekleştirilen germinasyon çalışmaları, ticari biyolojik indikatörlerle karşılaştırılmış ve benzer sonuçlar elde edilmiştir.

Anahtar kelimeler: Sterilizasyon, Geobacillus stearothermophilus, Alfa Glukosidaz, Enzim aktivitesi